石蠟microRNA熒光定量PCR檢測
實(shí)驗介紹microRNA 長(cháng)度大約在22nt左右,相對比較穩定,使檢測石蠟組織中microRNA的表達成為可能,據研究表明,石蠟組織與新鮮組織中的microRNA表達水平相似,石蠟組織中的microRNA表達檢測與其保存時(shí)間的長(cháng)短沒(méi)有太大關(guān)系,可以使研究的樣本來(lái)源進(jìn)一步豐富,特別是珍貴性的樣本來(lái)源。
我們通過(guò)不斷改進(jìn)與摸索建立了一個(gè)比較成熟的石蠟組織microRNA實(shí)驗體系,包括提取、RNA的嚴格質(zhì)控、定量,可以為研究人員提供可靠的microRNA定量檢測實(shí)驗技術(shù)服務(wù)
交付結果:實(shí)驗報告、樣本返還
質(zhì)量保證:客觀(guān)、公正、可信數據結果
交付時(shí)間:大約5-10個(gè)工作日(根據預實(shí)驗、樣本數量情況決定)
服務(wù)項目
服務(wù)流程1、 依據客戶(hù)提供的基因ID或基因名稱(chēng)設計合成引物(含驗證)
2、 標準品制備:只針對于絕對定量,相對定量多種內參可供選擇(如:U6,miR16等)
3、 RNA提取及RNA質(zhì)量分析:采用Invitrogen的TRIzol 進(jìn)行裂解提取,RNA提取質(zhì)量有瓊脂糖凝膠電泳及分光光度計雙重質(zhì)控
4、 逆轉錄:嚴格按照f(shuō)ermentas的反轉錄試劑盒要求抽取質(zhì)控合格的RNA,并且使用基因特異性引物進(jìn)行反轉錄,以最大程度的確保反轉錄酶的反轉效率
5、 預實(shí)驗驗證樣品和引物:依據客戶(hù)選定內參及基因,對客戶(hù)全部樣本內參及個(gè)別樣本基因進(jìn)行驗證,以確保樣本的反轉錄情況及基因的設計
6、 正式實(shí)驗:在以上所有質(zhì)控合格的情況下,每個(gè)樣本每個(gè)基因進(jìn)行四個(gè)復孔的重復檢測,確保至少提供三個(gè)復孔Ct≤0.5的數據
7、 實(shí)驗報告:提供詳細的實(shí)驗報告,包括RNA提取電泳圖、擴增曲線(xiàn)、溶解曲線(xiàn)及數據結果分析
樣本要求石蠟切片(≥10張):厚度10-20μm,石蠟組織塊或固定組織均可
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